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酵素處理米蛋白水解物之製備條件及功效性評估

為了解決revert back中文的問題，作者陳慧如 這樣論述：

近年來，在保健食品的開發中，已經進行了許多來自於植物蛋白質的生物活性胜肽的使用與研究。具有生物活性的胜肽也已被當作藥物使用，用於治療目的，例如：調節糖尿病、調節膽固醇及調節血壓等慢性疾病。本研究擬以不同品種米為原料，探討不同品種米中米蛋白之性質，並以不同澱粉酶(細菌型及黴菌型)去除澱粉，建立適合的蛋白質水解模式，期待較低溫度的澱粉水解可以保留胜肽更多的生物活性及降低生產耗能。其次，以分子量劃分水解物，了解胜肽之分子量及胺基酸組成，作為往後應用及開發活性胜肽商品之參考。在抗氧化方面的結果顯示，細菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物之總酚與類黃酮含量為1.23 ± 0.17 mg GA/g RPH及32

.2 ± 0.08 µg QE/g RPH；黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物則為2.50 ± 0.76 mg GA/g RPH及26.0 ± 0.65µg QE/g RPH。ABTS自由基的半清除活性能力(IC50)為2940.7 ± 583.9 μg/mL；黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物則為2076.0 ± 845.0 μg/m。DPPH自由基的半清除活性能力(IC50)為35.50 ± 1.8 mg/mL；黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物則為42.58 ± 2.1 mg/mL。細菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的還原能力6.21 ± 1.24 mg VCE /g;黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的還

原能力6.95 ± 1.40 mg VCE /g。氧自由基吸收能力表現方面，細菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物為31.25 µmol TE/g RPH；黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解則為473 µmol TE/g RPH。在皮膚保健能力中，抑制酪胺酸酶測試之結果顯示，細菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的IC 50 = 104.72 mg/mL;黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的IC 50 = 107.6 mg/mL。抑制玻尿酸酶測試之結果顯示，細菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的IC 50 = 7.61 mg/mL;黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的IC 50 = 8.91 mg/mL。黴菌型澱粉酶處理的蛋白質

水解物在皮膚保健相關能力表現上略差於細菌型澱粉酶處理的蛋白水解物，但抗氧化能力部份整體比細菌型澱粉酶處理的蛋白水解物佳，因此，後續實驗將選由黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物進行以下的試驗。使用分子量切割(MWCO)為10及1 kDa 之薄膜將粗水解液做劃分，並輔以SEC-HPLC測定其分子量，酵素水解過程中，蛋白質的水解會產生不同分子量的胜肽，結果發現黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物的分子量落在0.15 – 1081.77 kDa的範圍內。黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物主要的分子量則為0.95、1.96及25.9 kDa的分子量分佈。結果顯示，利用Alcalase水解黴菌型澱粉酶處理的米蛋白粗萃物

，可以將蛋白質水解成分子量幾乎小於5 kDa的胜肽。不同區分物都含有較高含量的穀胺酸、天冬胺酸、精胺酸、白胺酸、酪胺酸、苯丙胺酸、丙胺酸及絲胺酸，其中，疏水性胺基酸((hydrophobic amino acids, HA)及芳香族胺基酸((aromatic amino acids, AAA)以MW < 1 kDa的含量最高，分別為272.6及98.6 mg/g。此外，支鏈胺基酸(branched chain amino acids, BCAA)的含量也是3種區分物中最高的(158.53 mg/g)。抗氧化能力部分，DPPH自由基清除能力的IC 50值範圍在26.7 - 39.4mg/mL之，

其中MW 10 kDa) 級分(IC50 值為 39.4 ± 1.19 mg/mL)顯著高於(p < 0.05)。清除ABTS自由基的IC50值。結果顯示 MW > 10 kDa的組分(IC50 = 1.29 ± 0.20mg/mL)在三個組分中是最有效的(p < 0.05)。結果顯示出，分子量較高的區分物(MW > 10 kDa)較分子量較高的區分物(MW < 1 kDa)具有更好的清除ABTS 自由基的能力。還原能力部分在MW < 1 kDa 區分中發現最高的鐵還原能力(1.6 ± 0.19 mg AAE/g水解物)，顯著高於 1-10 kDa 區分和MW > 10 kDa區分(p <

0.05)。另外，ORAC分析中的動態螢光衰減曲線，利用積分的方式計算曲線下的面積，經過計算得知MW < 1 kDa、MW 1 - 10 kDa和MW > 10 kDa，ORAC值分別為774、576和603 µmol TE/g RPH。利用皮爾森(Pearson)相關分析用於探討抗氧化能力與組成分之間的線性相關。由Pearson相關係數測試顯示ORAC與TPC顯著正相關(r = 0.999, p < 0.05)。DPPH和ABTS自由基清除活性的IC50與胺基酸組成分的含量呈現負相關(r = -0.986至-1.000)。胜肽中的胺基酸種類是決定生物活性的關鍵因素。芳香族胺基酸與還原能力顯著

相關(r = 0.997, p < 0.05)。另外，使用的黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物MW< 1 kDa 區分物都減少了 LPS 刺激的炎症介質的產生。特別是，在劑量 200 μg/mL下顯示出對細胞激素的抑制效果最為顯著抑制(p < 0.05)。因此，可以得知黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物MW< 1 kDa 區分物可能對 LPS 誘導的炎症最有效的治療作用。本研究開發至今，嘗試不同的米的品種及澱粉去除方式獲得米蛋白粗萃物，並且水解之後探討水解的最大效應，進行對皮膚保健及抗氧化能力的篩選，選定以黴菌型澱粉酶處理的蛋白質水解物進行不同分子量的區分，也提出許多的體外試驗數據，蛋白質來源也選擇無

過敏源問題的米蛋白做為主題，探討其對抗氧化能力及初步的抗發炎能力。

發展具有顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子和類鐸受體第二型促效劑雙重佐劑功能的癌症疫苗

為了解決revert back中文的問題，作者嚴婉倫 這樣論述：

腫瘤內浸潤未成熟骨髓細胞在腫瘤免疫逃脫中扮演重要的角色，並侷限癌症免疫治療的效力。先前研究顯示，在腫瘤微環境 (TME) 中積累的未成熟骨髓細胞是導致 T 細胞功能缺失的主要原因之一。類鐸受體促效劑為已知有效的免疫刺激佐劑，可激活骨髓細胞。此外，顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子 (GM-CSF) 是一種骨髓生成生長因子，具有刺激骨髓細胞分化和募集的功能。因此，藉由合併類鐸受體第二型(TLR2)促效劑和GM-CSF組合的免疫療法可能對刺激骨髓細胞產生協同作用，進而增強抗腫瘤反應。於此，我們以人類乳突病毒第十六型 (HPV16) E7突變蛋白(E7m)為腫瘤抗原，藉由大腸桿菌的表達系統生產具有TLR

2 促效劑的脂蛋白和老鼠GM-CSF (MoGM) 活性的雙重佐劑腫瘤抗原的重組蛋白（rlipoE7m-MoGM）。我們觀察到雙重刺激TLR2 和 GM-CSF可協同作用於調節腫瘤浸潤骨髓細胞群，其機轉為藉由增加CCR7+CD103+ cDC1s，並減少腫瘤相關巨噬細胞的數量。值得注意的是這種免疫療法透過腫瘤內 (i.t.) 或皮下 (s.c.) 的治療途徑皆可有效地引發全身性的抗腫瘤反應，治療各種在老鼠上已生成的同品系腫瘤模型並防止癌細胞轉移。與此結果一致，rlipoE7m-MoGM療法誘導抗原特異性 CD8+ T 細胞浸潤於腫瘤內；特別的是那些腫瘤浸潤的 CD8+ T 細胞是高度表現Ki6

7持續增殖，並表達更高量的 IFN-γ 和穿孔素。總結我們的結果顯示雙重激活 TLR2 和 GM-CSF透過調節腫瘤內骨髓細胞群來克服TME中的免疫抑制性，這反過來增強腫瘤特異性 CD8+ T 細胞的細胞毒殺功能。此研究表明先前未探索的TLR2 促效劑脂蛋白和 GM-CSF 的組合優勢可以協同先天性-適應性免疫反應進而控制腫瘤生長和轉移。