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台灣產新木薑子屬植物及其次級代謝物對於輔助型T細胞介導的免疫調節作用及機制探討

為了解決醫管局hr app下載的問題，作者鄭尹華 這樣論述：

新木薑子屬(Neolitsea)為樟科類植物，主要分布於熱帶地區如巴西及東南亞地區，其種類高達100種以上。臺灣特有種之新木薑子屬植物包含高山新木薑子、大武新木薑子、南仁新木薑子及小芽新木薑子。前人文獻顯示該屬植物的傳統用途包含止痛消腫、袪濕止癢、治風濕骨痛等。新木薑子屬植物富含倍半萜類、三萜類、生物鹼及固醇類，歷史文獻指出這類富含萜類植物於不同的實驗模式中具有抗腫瘤、抗菌、抗發炎、免疫調節及促進血管收縮等許多藥理活性。免疫系統為對抗外來病原及移除癌化細胞的重要防禦機制。T細胞可藉由分泌細胞激素調節先天及後天免疫反應於後天免疫中扮演重要的角色。不同的輔助型T細胞(Th)可藉由分泌不同的細胞激

素參與調控細胞免疫反應(cellular immunity)及體液免疫(humoral immunity)反應。第一型Th(Th1) 細胞藉由分泌白介素-2(IL-2)及干擾素-γ(IFN-γ)等細胞激素活化巨噬細胞以執行細胞媒介免疫反應以對抗病毒感染、細胞內病原感染及抑制腫瘤細胞的形成；第二型Th(Th2 )細胞藉由分泌白介素-4、白介素-5及白介素-13以活化B細胞，促進分泌抗體以增加體液免疫反應。新木薑子屬植物富含具抗發炎及免疫調節之成分，然而目前對於臺灣產新木薑子如何調節免疫功能尚不明確。本研究的目的是探討臺灣產新木薑子成分對於Th細胞功能的免疫調節作用。本研究測試10種不同臺灣新木薑

子植物的根、莖、葉部(包含: 銳葉新木薑子(N. aciculata)、變葉新木薑子(N. aciculata var. variabillima)、高山新木薑子(N. acuminatissima)、武威新木薑子(N. buisanensis)、大武新木薑子(N. daibuensis)、南仁新木薑子(N. hiiranensis)、五掌楠(N. konishii)、小芽新木薑子(N. parvigemma)、金新木薑子(N. sericea var. aurata)及蘭嶼新木薑子(N. villosa))等不同萃取物對於初代小鼠脾臟細胞分泌細胞激素的影響，除了武威新木薑子根部萃取物對於小鼠

脾臟細胞有細胞毒性外其他萃取物無明顯的細胞毒性，脾臟細胞經由刀豆蛋白A(concanavalin A; ConA)細胞分裂素刺激之體外試驗發現，銳葉新木薑子、蘭嶼新木薑子及五掌楠葉部萃取物可抑制IFN-γ產生；變葉新木薑子、南仁新木薑子葉萃取物可同時抑制Th1/ Th2的細胞激素，顯示不同的新木薑子萃取物調節Th細胞功能的反應不同。進一步以 CD3/CD28抗體刺激脾臟細胞評估T細胞活化及功能的影響，變葉新木薑子對於干擾素-γ、介白素-10及介白素-17產生具有全面的抑制作用，而五掌南則是明顯降低干擾素-γ及介白素-10的產生。臺灣特有種南仁新木薑子葉部萃取物因其次級代謝物已被前人發現有抗發炎

及抑制人類中性球產生活性氧化物質的能力，因此我們進一步探討其活體調節抗原專一性的免疫反應的活性。由活體實驗結果顯示，南仁新木薑子葉部萃取物抑制介白素-2、介白素-12及干擾素-γ產生，且能抑制抗原專一性IgM及IgG2a的產量，利用電腦模擬預測模式(in silico)挑選葉部萃取物成分中14個無明顯肝毒性及基因毒性之次級代謝物進行後續研究。利用OVA專一性的脾臟細胞之離體試驗以評估活性成分調節T細胞的作用，研究發現2個萜類及1個雙萜類的衍生物(石竹烯氧化物、高甘醇三酮D及反式植醇)具有抑制干擾素-γ活性，且石竹烯氧化物可藉由抑制IFN-γ的產生和Th1調節相關基因的表達以調節Th1媒介的免疫

反應。 異常的免疫刺激及Th1/Th2反應失衡均可能導致各種免疫疾病。目前有許多免疫抑制劑的開發用於治療過度表現的免疫反應及T細胞媒介的免疫疾病，然而長期使用容易有嚴重的不良反應。藉由開發可調節不同T細胞免疫反應的活性成分可增加更多的免疫調節藥物以治療如多發性硬化、類風濕性關節炎及遲發型的過敏反應(delay-type hypersensitivity; DTH)。DTH為一種T 細胞媒介的免疫反應，Th1 細胞於此類過敏反應中扮演重要的角色。DTH 反應需要抗原專一性的T 細胞被吸引至抗原暴露的局部組織(recruitment)且被活化後於局部釋放具有化學趨化性(chemotactic)及

免疫細胞活化相關的細胞激素，以增加血管的通透性、促進纖維蛋白的沉積(fibrin deposition)及吸引更多的免疫細胞前來執行免疫反應。過度活化的Th1 免疫反應會釋放一系列的Th1 細胞激素，其中干擾素- γ 會活化巨噬細胞，使得巨噬細胞釋放更多如溶小體酵素、活性氧化物、一氧化氮及促發炎之細胞激素(pro-inflammatory cytokines)等發炎媒介物質(inflammatory mediators)，DTH動物模式可以藉由局部給予抗原誘導腳掌或耳朵產生腫脹發炎現象來觀察免疫反應的強弱。由活體實驗結果發現，南仁新木薑子之葉萃取物及石竹烯氧化物具有緩解DTH腳掌腫脹的活性，包

含減少腳掌的厚度及組織T細胞及巨噬細胞浸潤到血管周圍的數量。Notch 蛋白為細胞表面的受體其活化後可調控細胞分化、增生與凋亡。T 細胞表現之Notch 受體可藉由與抗原呈現細胞相對配體(ligand)結合後進一步調節下游Th1細胞轉錄因子T-bet和IFN-γ的產生，對於調節Th1細胞分化具有重要的角色。研究證實活體給予石竹烯氧化物可抑制Th1相關的免疫反應且可調節Th1相關的轉錄因子T-bet、Notch及STAT-1等基因的表現，及減少CD4細胞Notch蛋白的表現，為具有專一性調節Th1免疫反應的成分具有進一步開發的潛力。同時觀察給藥小鼠之肝及腎臟組織並未顯示明顯的器官毒性，且離體微核

試驗結果顯示石竹烯氧化物不具基因毒性。綜合本研究結果顯示，南仁新木薑子葉部萃取物及其次級代謝物-石竹烯氧化物可藉由抑制干擾素- γ 及Th1調控相關的基因達到調節Th1免疫反應作用，且綜合毒性試驗顯示其活性濃度下不具明顯的肝、腎及基因毒性，具有後續開發為緩解Th1介導免疫疾病藥物的潛力。

藍綠藻水萃物對耳鳴相關接受器表現之研究

為了解決醫管局hr app下載的問題，作者黃知偉 這樣論述：

耳鳴是體內產生的聲音，非受外來音源刺激所造成。嚴重的耳鳴會影響情緒、注意力甚至是生活品質，目前為止對耳鳴的治療方法仍有待進一步研究。本實驗目的為探討藍綠藻(Spirulina)水萃物對水楊酸誘導老化促進小鼠(senescence accelerated prone mice；SAMP8)自覺性耳鳴動物模式，耳鳴相關接受器表現之影響。實驗選用三月齡雄性SAMP8小鼠隨機分成控制組、腹腔注射300mg/kg BW水楊酸誘發耳鳴組及管灌1000mg/kg BW藍綠藻後腹腔注射水楊酸誘發耳鳴組。實驗期間記錄體重與進行主動迴避試驗。試驗後犧牲，評估血液生化值並進行腦幹、額葉、海馬迴、顳葉及內耳等部位c

annabinoid receptor 1(CB1) 、vanilloid receptor type 1(VR1)、dopamine D1A receptor及γ-amino butyric acid(GABA) Aβ3 receptor mRNA表現量之分析。結果顯示，給予水楊酸與藍綠藻水萃物並不會影響小鼠的肝、腎功能。水楊酸的給予會誘發耳鳴使誤判次數增加，成功迴避反應次數則呈下降的趨勢；藍綠藻水萃物，可改善誤判及成功迴避次數。基因表現結果發現，水楊酸會顯著減少腦幹、額葉、海馬迴、顳葉及內耳的CB1 receptor及GABA Aβ3 receptor mRNA表現量，而藍綠藻水萃物可顯著

增加其表現量。另水楊酸會顯著增加腦幹、海馬迴、顳葉及內耳中D1A receptor mRNA表現量，藍綠藻水萃物則可顯著降低其表現；此外，水楊酸也會顯著增加腦幹、額葉、海馬迴及顳葉中VR1 receptor mRNA表現量，藍綠藻水萃物亦能顯著降低其表現。綜合上述，藍綠藻水萃物可能藉由調控耳鳴相關接受器的表現，而改善了老化促進小鼠因水楊酸所誘發的自覺性耳鳴。