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酸性壓力影響細菌產生及對抗大腸桿菌素ColV之機制

為了解決evga進不去的問題，作者王勇勝 這樣論述：

中文摘要Colicin V（ColV）為透過 TonB 系統進入細菌體內，以破壞膜電位的方式造成殺菌效果的離子孔洞型大腸桿菌素。 ColV 由質體所產生，其上帶有 cvaA、cvaB 及 cvaC、cvi 四個基因，分別與其運送分泌、合成及免疫有關。前人研究指出，酸性壓力之下，會使得含 ColV 產生菌之菌株較無殺菌力，並推測可能是透過直接或間接的方式來影響其產量。本實驗室先前的研究也指出，酸誘發基因中的 gadX 及 gadY 會減少胞膜蛋白 BtuB 的表現量，進而使得敏感菌更能抵抗 ColE7 的毒殺。因為 gadX 及 gadY 屬於 global 的調控因子，因此本研究便探討 ga

dX 及 gadY 是否也會對 ColV 產生菌的殺菌力以及敏感菌的抗性有類似酸所造成的影響。首先將含有大量表現 gadX、 gadY 及 gadXY 的質體分別送入 ColV 產生菌株進行殺菌實驗，結果發現含有 pGadXY 之菌株較不殺菌，推測 gadXY 可能透過某些機制使得 ColV 的產量變少。於是便將負責 ColV 運送分泌及合成有關的 cvaAB 及 cviC 基因啟動子以 PCR 增殖出來，連接至 LacZ 報導基因測其啟動子是否受到 GadX 及 gadY 之調控。結果發現 gadXY 之大量表現導致啟動子的強度增加，而經由分析細菌胞內蛋白質之殺菌力時，確認了在 gadXY

大量表現下，ColV 的產量並未減少，而是因為留在胞內未能分泌出去才導致殺菌力降低。在敏感菌對 ColV 的抗性實驗這一方面，本研究亦發現含有 pGadXY 質體的敏感菌，對 ColV 的毒殺呈現了完全的抗性。目前已知 ColV 的分泌需要膜蛋白 TolC（54 kDa）的參與，ColV 的攝取則是要透過膜蛋白 Cir（70 kDa）、TonB（26 kDa）、ExbB（26 kDa）、ExbD（15 kDa）的作用。本實驗室先前的研究中，也顯示 gadXY 的大量表現會使得大小約 50、35、25、15 kDa 的蛋白質產量減少，因此推測 gadXY 可能藉由降低膜蛋白的產生，進而影響 Co

lV 的分泌以及敏感菌的抗性。