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國立屏東科技大學 熱帶農業暨國際合作系 金石文、陳福旗所指導 Jutamas Kmchai 茱塔瑪的 甘藍實生苗在鉬、鎘、鋅逆境下抗氧化酵素與花青素基因表現及利用分子標記鑑定茄子種間雜種之研究 （2012），提出Luna sea true blue關鍵因素是什麼，來自於金屬逆境、甘藍、抗氧化活性、花青素基因表達、茄屬植物、種間雜種、分子標記。

而第二篇論文國立臺灣海洋大學 水產養殖學系 周信佑所指導 王麗嘉的 台灣鮑三種血球細胞形態功能之初步研究 （2006），提出因為有 台灣鮑、血球細胞、酵素染色、型態功能的重點而找出了 Luna sea true blue的解答。

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甘藍實生苗在鉬、鎘、鋅逆境下抗氧化酵素與花青素基因表現及利用分子標記鑑定茄子種間雜種之研究

為了解決Luna sea true blue的問題，作者Jutamas Kmchai 茱塔瑪 這樣論述：

蔬菜富含營養為人類及動物所需。甘藍(Brassica oleracea var. capitata) 及茄子(Solanum melongena)為世界上二種重要的蔬菜。雖然對這二種蔬菜的需求呈穩定的增加，然而在生產上，常因病害、蟲害、生物及非生物與其他環境因子影響造成嚴重的減產。因此，針對這些問題，利用育種改良以增加產量及改善品質有其迫切性。有關於這些因子的關鍵生理調控背景的研究及利用分子技術輔助育種，有助於育種工作的進行。本研究的第一部分針對甘藍實生苗觀察在MS培養基中添加重金屬如鎘(cadmium, Cd)、鋅(zinc, Zn)、鉬(molybdenum, Mo)其對下胚軸、莖、根長

度及根毛生長之抑制。在過量的鎘, 鋅及鉬處理下，相較於對照組，細胞呈現中毒導致生長遲緩。然而，在添加過量鉬的培養基中添加80 mM脯胺酸(proline, Pro) 或水楊酸(salicylic acid, SA) ，可使50 %的甘藍實生苗本葉回復生長，在添加過量的鉬下添加Glutathione (GSH) ，相較於單獨添加鉬，可誘導100 %本葉生長同時增加下胚軸的長度。在逆境下，甘藍會誘發花青素在子葉及下胚軸的表皮細胞累積。以鎘及鋅處理實生苗，以1% HCl/methanol 萃取之花青素溶液呈現粉紅色，然而以鉬處理則產生較其他處理多的藍色花青素。與花青素生合成相關的基因PAL, C4H

, CHS, F3H, F3′H, LDOX, UF3GT, 及GST，在短時間處理鉬，均呈現基因啟動。以HPLC分析，在過量的鉬、鉬添加脯胺酸及鉬添加GSH，在甘藍幼苗內的主要花青素與紅甘藍相似，均為cyaniding-3-glucoside類群。然而過量的鉬相較於對照組的MS培養基有較高的量。進一步言，過量的鉬添加脯胺酸減少了chlorophyll a含量，但chlorophyll b及葉綠素總量則較對照組及不添加脯胺酸高。植物在逆境下，可能可藉由提高抗氧化酵素superoxide dismutase (SOD), ascorbate peroxidate (APX) and catala

se (CAT) 活性保護細胞的傷害。在不同濃度的鉬添加脯胺酸處理的實生苗有較高的SOD, APX及CAT活性。進一步的試驗，添加GSH and SA後，抗氧化酵素活性會增加，同時氧化物指標物malondialdehyde (MDA) 則會在添加GSH及SA在過量的鉬處理組中下降。本論文的第二部分是利用RAPD及ISSR分子標誌鑑定茄子(Solanum melongena L.) 及其相關種萬桃花(S. torvum) 的種間雜種。由七個RAPD及十一個ISSR引子可鑑別出二十一株實生苗中有五株為真實的種間雜種。除了分子標記外，植株及葉部特徵亦介於雙親本之間，證實其為雜交種。由本研究的結果顯示

，生理及分子技術的重要性及有助於進一步的育種工作。

台灣鮑三種血球細胞形態功能之初步研究

為了解決Luna sea true blue的問題，作者王麗嘉 這樣論述：

本論文使用光學顯微鏡與穿透式電子顯微鏡觀察台灣鮑血球細胞的型態與細微構造。其中透明球的細胞質中不具有顆粒存在、細胞核內有染色質濃縮的現象、細胞整體染色性質呈現嗜鹼性且具有良好的貼附能力。小顆粒球的細胞質中充滿嗜伊紅性小顆粒、細胞核多為長橢圓形且染色後呈現嗜鹼性、貼附能力較透明球弱。大顆粒球的細胞質中含有明顯的嗜伊紅性大顆粒、細胞核形狀為卵形或雙瓣狀、染色後細胞核呈現嗜鹼性、不具有貼附能力。另外計量三種血球細胞的直徑大小、細胞核大小與核質比的結果發現大顆粒球的細胞直徑最大 (9.1□0.42 □m)，而透明球的細胞直徑最小 (6.95□0.06 □m) ，透明球之核質比明顯較其他兩種血球大。嘗

試用Percoll連續梯度分離三種血球細胞次族群的結果發現透明球位於密度 1.038- 1.062 g/ml，而在密度為 1.074- 1.083 g/ml之間的血球細胞大部分為小顆粒球，最後在密度為 1.1228 g/ml則可以發現大顆粒球；而以流式細胞儀分析台灣鮑血球細胞次族群的結果也同樣呈現三個區塊。接著使用酵素染色與化學染色觀察以上三種血球細胞的組成，酸性磷酸酶的染色結果：透明球與小顆粒球都呈現陽性反應；鹼性磷酸酶與碳酸鈣的染色結果：三種血球細胞都呈現陰性反應；過氧化酶與脂質染色的染色結果：三種血球細胞都呈現陽性反應。另外觀察中性紅攝入後累積於溶小體的情形、酵母多醣的吞噬能力與呼吸爆活

性評估以上三種血球細胞的初步免疫相關能力。中性紅攝入的結果顯示三種血球細胞都具有溶小體；酵母多醣的吞噬結果則顯示小顆粒球具有比透明球更強的吞噬能力，而大顆粒球則不具有吞噬能力；呼吸爆活性的結果顯示小顆粒球產生超氧陰離子的能力也比透明球強，而大顆粒球則不具有產生超氧陰離子的能力。最後觀察菇多醣體與緊迫因子 (運輸、疾病) 對台灣鮑血球細胞所產生之影響。結果顯示注射菇多醣體組的總血球數、活性氧物質生成量、顆粒球數量皆比控制組高，但超氧岐化酶活性則呈現相反的結果。運輸後採血的結果顯示，在第2、4天時顆粒球的比例明顯升高，第7天則有下降現象。而經由人工感染溶藻弧菌之台灣鮑的血球比例中發現顆粒球有增加的

現象。依據上述結果推測小顆粒球為三種血球細胞中最具有免疫能力的血球細胞。

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