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Interleukin-6 小分子干擾核糖核酸之奈米載體包覆系統應用於雷射輔助經皮吸收以抑制乾癬發炎

為了解決360相機推薦2021的問題，作者林芊郁 這樣論述：

總目錄指導教授推薦書..............................................................................................................口試委員會審定書..........................................................................................................誌謝...............................................................

............................................................... iii中文摘要....................................................................................................................... ivAbstract ..................................................................................................

........................ v總目錄......................................................................................................................... vii圖目錄........................................................................................................................... xi表目錄..............

............................................................................................................ xv第一章、緒論................................................................................................................ 1第一節、皮膚簡介及乾癬 (psoriasis) ............................................

..................... 11-1 皮膚簡介 ................................................................................................ 11-2 乾癬 ........................................................................................................ 4第二節、藥物穿透皮膚途徑及影響因素......................................

...................... 72-1 藥物穿透皮膚途徑 ................................................................................ 72-2 局部藥物吸收途徑 (topical skin drug delivery pathway) .................... 82-3 影響藥物穿透皮膚因素 ........................................................................ 92-4 藥物經皮吸收促進方式

...................................................................... 10第三節、雷射 (laser) ......................................................................................... 123-1 雷射簡介 .............................................................................................. 123-2 雷射原理 ..

............................................................................................ 123-3 雷射光譜 .............................................................................................. 143-4 雷射分類 ........................................................................................

...... 153-5 飛梭雷射 (fractional laser) .................................................................. 173-6 飛梭二氧化碳雷射 (fractional CO 2 laser) .......................................... 183-7 鉺雅鉻雷射 (erbium:yttrium aluminium garnet laser, Er:YAG laser)19第四節、小分子干擾核糖核酸 (small interfering RNA, s

iRNA) .................... 194-1 siRNA 簡介 .......................................................................................... 194-2 核糖核酸干擾 (RNA interference, RNAi) ......................................... 204-3 阻礙 siRNA 傳送之障礙 ............................................................

....... 214-4 傳遞 siRNA 之方法 ........................................................................... 22第五節、奈米粒子 (nanoparticles).................................................................... 225-1 常見遞送 siRNA 之奈米粒子種類 ................................................... 235-2 聚乳酸乙醇酸 (po

ly(lactic-co-glycolic acid, PLGA) ......................... 255-3 奈米粒子之吞噬機制 .......................................................................... 26第二章、研究動機與實驗設計.................................................................................. 28第一節、研究背景及實驗動機...................................

....................................... 28第二節、實驗設計與流程.................................................................................. 29第三章、材料與方法.................................................................................................. 30第一節、儀器與試劑...........................................

............................................... 301-1 儀器 ...................................................................................................... 301-2 試劑 ...................................................................................................... 31第二節、實驗方法................

.............................................................................. 332-1 包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子............................................. 332-2 包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子物化性質分析..................... 342-3 老鼠巨噬細胞 (RAW 264.7) 細胞培養 ..........................................

.. 362-4 人類永生化角質形成細胞 (HaCaT cells) 細胞培養 ........................ 372-5 包覆 IL-6 siRNA PLGA 奈米粒子之體外測試 (in vitro) ............... 392-6 雷射方法與條件設定 .......................................................................... 432-7 包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子經皮吸收之能力研究......... 452-8 皮膚之組織病理學 (h

istopathology) .................................................. 492-9 包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子治療乾癬有效性活體試驗. 512-10 數據分析及統計方法 ........................................................................ 53第四章、實驗結果....................................................................................

.................. 54第一節、包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子物化學性質分析 ................ 541-1 包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子之粒徑大小、PDI 及表面電位測定 .................................................................................................. 541-2 PLGA 奈米粒子包覆 IL-6 siRNA 之包埋測定 .............................

.. 55第二節、包覆 IL-6 siRNA PLGA 奈米粒子之體外測試 (in vitro)............... 562-1 MTT 試驗測試 free IL-6 siRNA 與 包覆 IL-6 siRNA PLGA 之奈米粒子在 RAW 264.7 cells 及 HaCaT cells 之生物安全性 ........... 562-2 分析包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子抑制 RAW 264.7 cells及 HaCaT cells IL-6 表達作用 ...............................

........................... 612-3 分析 RAW 264.7 cells 及 HaCaT cells 攝取 PLGA 之奈米粒子 . 63第三節、經雷射施打後皮膚外觀之觀察.......................................................... 713-1 經雷射施打後皮膚微孔洞孔徑之變化 .............................................. 713-2 經雷射施打後皮膚外觀及組織學之變化 .....................................

..... 73第四節、體外皮膚吸收之研究.......................................................................... 784-1 投予 free IL-6 siRNA 皮膚吸收之研究 ............................................ 784-2 投予包覆於 NC 之 IL-6 siRNA 之皮膚吸收研究 ......................... 814-3 投予包覆於 FNC 之 IL-6 siRNA 皮膚吸收之研究 ...............

......... 834-4 投予 free IL-6 siRNA 和包覆於 NC 及 FNC 之 IL-6 siRNA 之毛囊內含量測定 ...................................................................................... 864-5 投予 free IL-6 siRNA 和包覆於 NC 及 FNC 之 IL-6 siRNA 於IMQ cream 誘導乾癬模式皮膚吸收之研究 ...................................... 874-

6 正立雷射共軛焦顯微鏡之皮膚影像 .................................................. 914-7 螢光顯微鏡之皮膚影像 .................................................................... 104第五節、治療乾癬之有效性活體試驗............................................................ 1085-1 活體試驗之皮膚外觀影像 ...........................................

..................... 1085-2 活體試驗之皮膚生理檢測變化 ........................................................ 1115-3 活體試驗之酵素免疫分析 ................................................................ 1165-4 活體試驗之組織病理學變化 ............................................................ 117第五章、綜合討論.....................

............................................................................... 121第六章、結論............................................................................................................ 128第七章、參考文獻...........................................................................................

......... 129圖目錄圖一、皮膚構造圖........................................................................................................ 1圖二、表皮層示意圖.................................................................................................... 3圖三、正常皮膚與乾癬皮膚示意圖............................................

................................ 4圖四、乾癬的發病機制................................................................................................ 5圖五、藥物穿透皮膚之路徑........................................................................................ 8圖六、促進藥物滲透皮膚之方法..........................................

.................................... 11圖七、自發輻射與受激輻射示意圖.......................................................................... 13圖八、雷射裝置示意圖.............................................................................................. 14圖九、雷射光譜示意圖....................................................

.......................................... 15圖十、換膚雷射類型示意圖...................................................................................... 18圖十一、siRNA 的形成與 RNAi 作用機制 ........................................................... 21圖十二、常用於遞送 siRNA 之奈米粒子示意圖 .....................................

............. 25圖十三、PLGA 之化學結構 ..................................................................................... 26圖十四、奈米粒子之吞噬機制.................................................................................. 27圖十五、Franz diffusion cell 裝置示意圖 ..................................................

.............. 46圖十六、不同濃度之 free siRNA 及 NC 與 FNC 包覆不同濃度之 IL-6 siRNA於 RAW 264.7 cells 共同培養後之細胞存活率 ...................................... 58圖十七、不同濃度之 free siRNA 及 NC 與 FNC 包覆不同濃度之 IL-6 siRNA於 HaCaT cells 共同培養後之細胞存活率 .............................................. 59圖十八、ELISA 測量 free

IL-6 siRNA 及 NC 與 FNC 包覆 IL-6 siRNA 於RAW 264.7 cells 及 HaCaT cells 共同培養後細胞中 mouse IL-6 表現量.................................................................................................................. 62圖十九、螢光光譜分析染上 NR 之 NC 及 FNC .............................................

.... 65圖二十、流式細胞儀分析 Raw 264.7 cells 及 HaCaT cells 攝取染上 NR 之PLGA 奈米粒子 ......................................................................................... 66圖二十一、Raw 264.7 cells 及 HaCaT cells 攝取染上 NR 之 PLGA 奈米粒子之平均螢光強度及校正後螢光強度......................................................

.... 67圖二十二、正立雷射共軛焦顯微鏡觀察 Raw 264.7 cells 攝取染上 NR 之 PLGA奈米粒子.................................................................................................. 69圖二十三、正立雷射共軛焦顯微鏡觀察 HaCaT cells 攝取染上 NR 之 PLGA 奈米粒子.................................................................................

..................... 71圖二十四、經雷射施打後利用相機拍攝感熱紙之影像結果.................................. 71圖二十五、感熱紙經雷射施打後利用倒立式顯微鏡觀察之影像結果.................. 72圖二十六、利用手持顯微鏡拍攝施打雷射後之豬皮皮膚...................................... 74圖二十七、利用倒立式顯微鏡拍攝施打雷射後之豬皮皮膚.................................. 75圖二十八、利用掃描式電子顯微鏡拍攝施打雷射後之豬皮皮膚..........

................ 76圖二十九、利用倒立式顯微鏡拍攝施打雷射後之豬皮皮膚外觀之組織學病理學變化................................................................................................................ 77圖三十、free IL-6 siRNA 和包覆於 NC 及 FNC 之 IL-6 siRNA 於正常豬皮和施予飛梭氧化碳雷射與鉺雅鉻雷射後之毛囊內含量.............................. 87圖三十一、free IL-6

siRNA 和包覆於 NC 及 FNC 之 IL-6 siRNA 於 IMQ 誘導乾癬模式皮膚施予飛梭氧化碳雷射與鉺雅鉻雷射後之第 24 小時之累積穿透量、穿透速率及皮內含量.................................................. 91圖三十二、以正立雷射共軛焦顯微鏡觀察未投予接有 FAM 螢光標記之 free IL-6 siRNA 於豬皮皮膚內分佈情形 ......................................................... 93圖三十三、以正立雷射共軛焦顯微鏡觀察未投予染上

NR 之奈米粒子劑型於豬皮皮膚內分佈情形.................................................................................. 94圖三十四、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予接有 FAM 螢光標記之 free IL-6siRNA 於豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形 ...................................... 95圖三十五、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 NC 於豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形.............................

......................................................... 96圖三十六、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 FNC 於豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形...................................................................................... 97圖三十七、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予接有 FAM 螢光標記之 free IL-6siRNA 於施予飛梭二氧化碳雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形.................

............................................................................................. 98圖三十八、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 NC 於施予飛梭二氧化碳雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形............................................ 99圖三十九、以正立共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 FNC 於施予飛梭二氧化碳雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形..............................

........ 100圖四十、以正立雷射共軛焦顯微鏡觀察投予接有 FAM 螢光標記之 free IL-6siRNA 於施予鉺雅鉻雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形 ........ 101圖四十一、以正立雷射共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 NC 於施予鉺雅鉻雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形.............................................. 102圖四十二、以正立雷射共軛焦顯微鏡觀察投予染上 NR 之 FNC 於施予鉺雅鉻雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形.....................

..................... 103圖四十三、以螢光顯微鏡觀察未投予染上 NR 之奈米劑型於於豬皮皮膚內分佈情形........................................................................................................ 105圖四十四、以螢光顯微鏡觀察投予染上 NR 之 NC 於正常豬皮皮膚、施予飛梭二氧化碳雷射及鉺雅鉻雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形.. 106圖四十五、以螢光顯微鏡觀察投予染上 NR 之 FNC 於正常豬皮皮膚、施予飛梭二氧化碳雷

射及鉺雅鉻雷射之豬皮皮膚 4 小時後皮內分佈情形................................................................................................................ 107圖四十六、活體試驗之外觀影像與手持顯微鏡影像............................................ 111圖四十七、活體試驗之皮膚生理數值及老鼠體重變化........................................ 115圖四十八、活體試驗之皮膚組織中 IL-6

表現量 ................................................ 117圖四十九、活體試驗之組織病理學切片染色........................................................ 120表目錄表一、汽化式雷射與非汽化式雷射之比較.............................................................. 17表二、包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子處方 ..........................................

...... 34表三、飛梭二氧化碳雷射簡介.................................................................................. 43表四、飛梭二氧化碳雷射實驗條件.......................................................................... 44表五、鉺雅鉻雷射簡介...........................................................................................

... 44表六、鉺雅鉻雷射實驗條件...................................................................................... 45表七、包覆 IL-6 siRNA 之 PLGA 奈米粒子粒徑大小、PDI 及 ZP ................. 54表八、PLGA 奈米粒子包覆 IL-6 siRNA 之包埋率 .............................................. 56表九、染上 NR 之 PLGA 奈米粒子粒徑大小、PDI 及 ZP ..

............................ 64表十、豬皮分別施予飛梭二氧化碳雷射及鉺雅鉻雷射後，free IL-6 siRNA 體外累積穿透量、皮內含量與促進倍數.................................................................. 80表十一、豬皮分別施予飛梭二氧化碳雷射及鉺雅鉻雷射後，包覆於 NC 之 IL-6siRNA 體外累積穿透量、皮內含量與促進倍數 .................................... 82表十二、豬皮分別施予飛梭二氧化碳雷射及鉺雅鉻雷射後，包覆於 FNC

之 IL-6 siRNA 體外累積穿透量、皮內含量與促進倍數 ................................. 85